怎么验精子的质量-羊的繁殖新技术

精液品质检查的目的是为了鉴定其品质的优劣,以便确定其利用价值。同时,它也反映种公牛的饲养管理水平和生殖功能的状态,是检验精液稀释、保存和运输效果的唯一手段,还能反映采精技术操作水平的高低。精液品质检查主要有以下几项。

1.精液的外观检查

(1)射精量

射精量是指公畜1次采精所射出的精液容积,可用带有刻度的集精瓶直接测出,公牛的射精量一般为3~10mL。绵羊、山羊的射精量见表2.2.1。当公羊的射精量太多或太少时,都必须查明原因。射精量太多,可能是由于副性腺分泌太多或其他异物(尿、假阴道漏水)混入所至;过少,可能是由于采精技术不当、采精过频、生殖器官功能衰退所致。凡是混入尿、水及其他不良异物的精液,均不能使用。

(2)色泽与气味

羊正常精液呈乳白色或浅乳黄色,其颜色因精子浓度高低而异,乳白色程度越重,表示精子浓度越高。若精液颜色异常,表明公羊生殖器官有疾病。精液一般无味,有的精液带有动物本身的固有气味,如羊精液略有膻味。精液若有异味,如尿味、腐败臭味时应弃去禁用。

(3)云雾状

羊正常精液因精子密度大而呈浑浊不透明状,肉眼观察时,由于精子运动而呈云雾状。精液浑浊度越大,云雾状越显著。乳白色云雾状越浓,表明精子密度和精子活力越高。

2.显微镜检查

(1)精子活率检查

精子的活率也称活力,是指精液中呈直线运动的精子所占的百分率。精子的活率可直接反映精子自身的代谢功能,与精子授精能力密切相关,是评定精液品质的一个重要指标。一般在采精后,精液处理前、后和输精前均要进行精子活率的评定。精子活率评定方法是,在37~38℃的环境下,用200~400倍的生物显微镜进行观察。多采用“十级评分制”,即按精子直线运动占视野中精子的估测百分比评为10个等级,100%直线运动者为1.0,90%者为0.9,以此类推。

(2)密度检查

精子密度是指单位容积(mL)精液内所含有的精子数目。目前,测定精子密度的方法主要有估测法、血细胞计数法和光电比色法。估测法是生产中常用的方法,常结合精子活力检查进行。根据显微镜下精子的密集程度,把精子的密度大致分为密(精子之间的距离小于1个精子的长度)、中(精子之间的距离大约等于1个精子的长度)、稀(精子之间的距离大于1个精子的长度)3个等级,这种方法能大致估计精子的密度,主观性强,误差较大。血细胞计数法是公畜精液做定期检查的一个方法,可以准确地测定每单位容积精液中的精子数,一般采用血细胞计数板进行。光电比色法是目前国际上普遍采用的测定羊精子密度的方法,其原理是利用精液的透光性,精子密度越大其透光性越差;此方法快速、准确、操作简便。

(3)形态检查

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图2.2.2 畸形精子示意图

①精子畸形率 一般情况下,羊的精液都有一定比例的畸形精子,正常精液的精子畸形率一般不超过20%。精子畸形的检查方法:取1小滴被测精液置于载玻片上,将样品滴以拉出形式制成抹片,切忌将精液推出而造成人为精子损伤。自然干燥5min,每样品制作2个抹片。在风干的抹片上滴上1.0~2.0mL中性福尔马林固定液,固定15min后用清水缓缓冲去固定液,吹干或自然风干。然后将固定好的抹片反扣在带有平槽的有机玻璃面上,把姬姆萨氏染液滴于槽和抹片之间,让其充满平槽并使抹片接触染液,染色1.5h后用清水缓缓冲去染液,晾干待检。将制备好的抹片在显微镜(400~600倍)下观察,每个抹片观察200个以上精子(分左、右2个区),取2个抹片的平均值,变异系数不得大于20%,若超过应重新制片。计算出畸形精子百分率。畸形精子形态如图2.2.2所示。

②精子顶体异常率 顶体异常有膨大、缺陷、部分脱落、全部脱落等数种,若超过一定比例会直接影响其受精率。

③检查方法 采用测定精子畸形率的方法制作抹片,自然干燥,用1~2mL福尔马林磷酸缓冲液固定。对含有卵黄、甘油的精液样品需用含2%甲醛的柠檬酸钠液固定。静置15min,水洗后用姬姆萨氏染液染色90min或用苏木精染液染色15min,水洗、干燥后再用0.5%伊红染液复染2~3min。水洗、干燥后置于1 000倍显微镜下用油镜检查,或用相差显微镜观察。每张抹片需观察300个精子,统计出精子顶体异常率。

3.生物学检查

精液中如果有大量的微生物存在,不仅会影响精子的寿命、降低受精力,而且还会导致疾病的传播。因此,目前国内外都十分注重精液的微生物检查,精液中含有的病原微生物及菌落数是精液品质评定的重要指标,并作为海关进出口精液的重要检查项目。