精液的保存-羊的繁殖新技术

1.液态精液的保存

(1)常温保存

常温保存是将精液保存在室温(15~25℃)下,也称变温保存。此方法保存的精液在3d内有正常的受精能力。其原理是利用精子正常代谢所产生的乳酸或CO2 +H2 O或加入一定量的酸,使精液的pH下降,抑制精子的活动,使精子保存在可逆的静止状态而不丧失受精能力。保存方法是按输精剂量分装,封口后放在室内、地窖或自来水中保存。保存温度要恒定,不能超过25℃,pH值不能太低,弱酸性即可,切记要加入抗生素。

(2)低温保存

低温保存是将精液放在0~5℃条件下保存,效果要比常温保存好,一般可保存7d左右不丧失授精能力。其原理是利用低温来抑制精子活动,降低精子代谢和运动的能量消耗。当温度回升后,精子又逐渐恢复正常代谢功能而不丧失授精能力。保存时稀释液中加入卵黄,缓慢降温(从30℃降至5~0℃时每min下降0.2℃左右为宜)后,按一个输精剂量分装在贮精瓶中,封口。用数层纱布或棉花包裹,置于0~5℃的低温环境(窖、旱井、水井、冰箱等)保存。输精前要升温,可直接将贮精瓶放到30℃的环境中。

2.精液的冷冻保存

(1)精液冷冻保存的概念

精液的冷冻保存是将采集的新鲜精液经特殊处理后经一定的降温程序,最后保存在液氮(-196℃)、干冰(-79℃)冷媒中,以达到长期保存目的的一种精液保存方法。

(2)精液的稀释

精液冷冻稀释液具有保护精子免受或减少冻害的作用,其主要成分是在低温保存稀释液的成分基础上再加入一定量的抗冻保护物质。精液冷冻稀释液主要有卵黄-柠檬酸钠-甘油液,卵黄-糖类-甘油液两种。稀释方法一般多采用一次或两次稀释法,一次稀释法常用于颗粒冻精,也可用于细管精液,适合于低倍稀释。两次稀释法效果最好,首先用不含甘油的稀释液(Ⅰ液)对精液进行最后稀释倍数的半倍稀释,然后把该精液连同Ⅱ液一起经1h缓慢降温至5~0℃,并在此温度下做第二次稀释。

绵羊精液的精子密度虽然比其他家畜都大,但稀释倍数却不能过高,这在常规人工授精中已经得到证实。绵羊冷冻精液的稀释倍数,一般都在5倍以下。这可能与绵羊子宫颈通道狭窄、弯曲多皱,不能做到深部输精及绵羊精子顶体经过冷冻、解冻后损坏程度严重有关。精子密度过小,黏度降低,即使加大输精量,也不能全部进入子宫颈内,容易引起倒流。但稀释倍数过低,稀释液的保护作用会降低。所以,绵羊精液在冷冻前的稀释比例多为1:2或1:3,也有采用1:1或1:4的。我国制作山羊冻精时,稀释比例一般为1:(1~4),而畜牧业较发达国家如德国、澳大利亚常用1:8稀释。

(3)精液的分装标记和封口

目前在冷冻精液产生过程可采用细管分装一体机进行精液的分装和封口,并同时在细管上标记有关信息。细管冷冻精液标记由16位数分四部分组成,其排列顺序由棉塞封口端开始。第一部分由3位数组成,表示公羊站代号,代号以全国畜牧总站公布的为准;第二部分由2位数组成,表示品种代号,品种代号以GB/T4143为依据;第三部分由6位数组成,表示精液生产日,6位数按年月日次序排列,年月日各占2位数字,年度的后2位数组成年度的2位数,月、日不够2位数的在其前面分别加“0”补充为2位数;第四部分由5位数组成,表示公羊号,公羊号取该公羊身份证号码的后5位数。每部分之间空1个汉字(2个字节)。除第二部分用汉语拼音大写字母表示外,其余均用阿拉伯数字表示。标记的字迹必须清晰易认,不易被擦掉。标记示例如图2.2.3所示。

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图2.2.3 精液的分类标记

(4)精液的降温与平衡

降温是指精液稀释后由30℃以上的温度,经1~2h缓慢降至5~0℃,以防止低温打击。平衡是指降温后,继续在0~5℃的环境中停留2~4h。使甘油充分深入精子内部,起到抗冻作用。在生产中降温和平衡可同时进行。将分装好的细管码排在细管盘中,直接放入0~5℃环境中停留4h左右。

(5)精液的冷冻

目前在冷冻精液生产单位多使用全自动冷冻机进行精液的冷冻。使用时首先在电脑中设计好冷冻的最佳温度曲线,冷冻仪与低温柜应尽量靠近,开启液氮灌阀门把冷冻仪降温至4℃,关闭风扇电源,待风扇完全停止后把已排满待冻细管的架子迅速放入冷冻仪,盖严盖子按预先设定好的程序自动完成冷冻过程。

(6)冷冻精液的剂型

目前羊的冷冻精液以细管型为主。

(7)冷冻精液的解冻

冷冻精液的解冻是验证精液冷冻效果的一个必要环节,也是输精前检查冷冻精液是否达到输精要求的一项必要工作。在生产中羊冷冻精液一般用38~40℃温水解冻效果最好。