克隆技术-羊的繁殖新技术

(一)概念

“克隆”一词来源于希腊语,原意为插枝,即无性繁殖的意思。动物克隆是指不经过有性生殖的方式而直接获得与亲本具有相同遗传物质的动物后代的过程。通常,将所有非受精方式繁殖所获得的动物均称为克隆动物。将产生克隆动物的方法称为克隆技术。广义上讲,克隆包括孤雌激活生殖、卵裂球分离与培养、胚胎分割以及核移植。核移植是生产克隆动物最为有效的技术。

(二)意义

①能使遗传性状优秀的个体大量增殖,大大加快羊育种进程。

②可扩大转基因动物的后代数量,提高转基因动物的效率。

③通过性别鉴定再克隆,可生产大量预知性别的动物后代。

④可用于珍稀和濒危动物的扩繁和保护。

⑤可满足动物实验和生物医学研究的特殊需要,提高实验的准确性。

以克隆技术为基础,可研究动物个体发生的核质互作关系、细胞核的分化和重编程、细胞的老化等基础问题。

(三)方法

1.胚胎分割

胚胎分割是通过对胚胎进行显微操作,人工制造同卵双生或多生的技术。胚胎分割又分为显微操作仪分割和徒手分割两种方法。

显微操作仪分割是将待分割胚胎用吸管固定,调节操作仪旋钮,将分割针(刀)调至胚胎正上方,再调节操作仪旋钮垂直将胚胎从中央切开,一分为二,然后将无透明带的两枚裸半胚进行移植或冷冻保存,也可将裸半胚装入空透明带内再移植或冷冻保存。

徒手分割是用链霉蛋白酶软化待分割胚胎,在实体显微镜下,直接用自制分割针(刀)将胚胎一分为二。裸半胚移植和冷冻保存同显微操作仪分割。

2.细胞核移植方法

细胞核移植分为胚胎细胞核移植和体细胞核移植两种方法,具体程序如下:

(1)核供体准备

将胚胎或体细胞制成单个胚胎细胞(卵裂球)或单个体细胞。

(2)核受体—卵母细胞的去核

将具有完整第一极体的卵母细胞的染色体连同周围胞质一起去除。

(3)注核

将单个胚细胞或体细胞注入去核的胞质质膜与透明带夹角处。

(4)卵母细胞胞质与注入核的融合

将二者在一定融合条件下进行融合,而后培养。

(5)核移植后卵母细胞的激活

将融合后的胚胎在一定条件下激活并培养。

(6)核移植胚胎培养

核移植胚胎在一定条件下进行培养,使其发育成早期胚胎,进行移植或冷冻保存。