胚胎干细胞技术-羊的繁殖新技术

(一)概念

胚胎干细胞又称为ES细胞或EK细胞,是一种从早期胚胎内细胞团或胎儿原始生殖细胞经分离、体外培养、克隆等得到的具有全能性的细胞。

(二)意义

胚胎干细胞在畜牧业、基础生物学和医学上具有重要价值。

①胚胎干细胞可用于转基因动物的生产。

②胚胎干细胞可用于研究哺乳动物个体的发生与发育规律。

③胚胎干细胞可用于体外研究细胞的分化规律。

④胚胎干细胞可用于研究基因的功能。

⑤胚胎干细胞可用于治疗人类的某些疫病。

(三)方法

胚胎于细胞分离培养方法的主要环节有:

1.选择抑制细胞分化的培养体系

培养体系要求不仅能促进胚胎细胞生长,还能抑制细胞分化。目前主要采用滋养层培养体系和条件培养体系以及培养液中添加分化抑制因子3种体系。

2.早期胚胎的选择

一般选择早期囊胚或囊胚阶段的胚胎,也可选择原始生殖细胞。

3.早期胚胎的分离、培养和传代

分离ES细胞的第一步是获得内细胞团(ICM),然后把ICM分散成单个细胞,再放入分化抑制剂培养体系中继续培养,当出现形态均一的未分化克隆细胞时,再把它分散成单个细胞或小细胞团,移入新的培养液中传代培养。

4.ES细胞的鉴定及保持

通过分离培养获得的ICM或PGCS细胞传至8~12代时,通过形态分化和细胞生物学等指标的鉴定,才能确认为ES细胞系,分离得到ES细胞以后,为克服长期培养对遗传物质的有害影响,采用常规保存或冷冻保存两种方法,以维持ES细胞的未分化状态。