羊人工授精的技术与方法

人工授精的技术环节主要包括采精、精液品质检查、稀释与保存、输精和精液的运输等。采精开始前1～2个月，要做好各项准备工作。

（1）配种前的准备工作　

① 整顿羊群　按羊的性别、年龄分群，在配种前的1.5～2个月，做好羔羊断奶工作，并给母羊驱虫、药浴，防止杂交乱配。劣质公羊一律去势。

② 种公羊的准备　人工授精用的种公羊，均应是特级、一级羊，体质结实、体形匀称，生产性能高，生殖器官正常，有明显的雄性特征，精液品质良好。

初次配种的公羊，如果性欲不高，不会爬跨，应加以调教。具体方法有：把公羊放入发情母羊群里；别的公羊配种时在旁观摩；按摩睾丸，每日早晚各一次，每次10～15分钟；将发情母羊阴道分泌物抹在公羊鼻尖上刺激性欲；调整饲粮配方，增喂鸡蛋，增加运动量。

为了查看饲料配方和饲养管理是否有问题，种公羊在配种前3周开始训练采精：第1周隔两日采精一次，第2周隔日采精一次，第3周每日采精一次，以提高种公羊的性欲和精液品质。如精液稀，是饲料中蛋白质的比例太低，精子活力低是运动量不足导致的。

③ 母羊补饲催情　对瘦弱母羊给予优饲，同时对参加配种的母羊应加强放牧和饲养管理，使母羊达到中上等膘情，确保发情整齐，尽量缩短配种期，提高受胎率。

④ 器械、药品的准备和消毒　人工授精器材的准备：对采精、稀释、保存精液、输精、精液运输等直接与精液接触的器械如假阴道（图5-6）、集精瓶（图5-7）必须注意洗涤与消毒，以防影响精液品质及受胎率。

图5-6 假阴道（李秀丽 拍摄）

图5-7 集精瓶（李秀丽 拍摄）

器械的洗涤可用洗衣粉或洗净剂。洗刷时可用毛刷、试管刷、纱布等。洗刷后用温水反复冲洗，除去残留物，而后用洁净蒸馏水冲洗两遍，用消毒干净纱布擦干或自然干燥。在洗刷假阴道内胎时，注意防止污垢存留在内胎上。对输精器械应彻底洗刷干净。器械洗涤后，需根据器械种类采用下列方法之一进行消毒：75%酒精消毒；水浴，煮沸15～20分钟消毒；火焰消毒等。

凡与精液接触的器械在用酒精消毒后，须用生理盐水冲洗。如用蒸馏水或过滤开水冲洗后，仍需再用生理盐水冲洗。

主要器械在使用前的消毒与冲洗。

a．假阴道内胎的消毒与冲洗　先用70%酒精擦拭后，待酒精挥发后，用蒸馏水冲洗两次，再用生理盐水冲洗两次。集精瓶及其他玻璃器皿的消毒及冲洗程序与假阴道内胎相同。

b．输精器的消毒与冲洗　输精器在吸入70%酒精消毒后，高压蒸汽消毒；在使用前用生理盐水冲洗两次。

c．开膣器的消毒与冲洗　开膣器可先用70%酒精棉球擦拭消毒或用0.1%高锰酸钾溶液消毒。消毒后可放在温开水中冲洗一次，再放在生理盐水中冲洗一次即可使用，也可用火焰消毒法消毒。

d．擦拭用毛巾的消毒　擦拭用毛巾应每日消毒一次，消毒方法是将其放于小锅内，蒸煮15～20分钟。

e．毛巾、擦布、桌布、过滤纸及工作服等的消毒　均应在高压灭菌器或高压消毒锅内进行消毒。

常用溶液及酒精棉球制备。

a．生理盐水制备　生理盐水为0.9%氯化钠溶液。配制方法是准确称量9克化学纯氯化钠粉溶解于1000毫升蒸馏水，经过滤煮沸消毒后，密封保存。

b．70%酒精制备　在74毫升95%酒精中加入26毫升蒸馏水即可。

c．酒精棉球与生理盐水棉球制备　将棉球作成直径2～4厘米大小，放广口玻璃瓶中，加入适量的70%酒精或生理盐水即可。勿使棉球过湿。所有的酒精棉球瓶须带盖，随用随开。

易损坏的玻璃器材、假阴道内胎（图5-8）等要有备用品。准备好公羊采精记录表、母羊配种记录表，还需准备做临时标记的各种涂料或记号笔等。

图5-8 羊假阴道内胎 （李秀丽 拍摄）

⑤ 母羊的发情鉴定　方法见本章第一节“羊的繁殖规律与发情鉴定”相关内容。

（2）采精　采精为人工授精的第一个步骤，为保证公羊性反射充分，射精顺利、完全，精液量多而洁净，必须做到稳当、迅速、安全。

采精前应选好台羊，台羊的选择应与采精公羊的体格大小一致，且发情症状明显。

安装好假阴道：安装假阴道时，注意内胎不要出褶皱，装好后用75%酒精棉球消毒。采精前的假阴道应保持有一定的压力、温度和润滑度。安装好的假阴道内温度为38～40℃，所以要求注进去的水温为50～55℃（图5-9）。为保证一定的润滑度，用灭菌玻璃棒蘸少许灭菌凡士林均匀涂抹在内胎的前1/2处。通过气门活塞用双连球吹入气体（图5-10），使内胎的内表面呈三角形而不向外鼓出为度，装上集精瓶（图5-11）。

图5-9 注水（李秀丽 拍摄）

图5-10 双连球的使用 （李秀丽 拍摄）

图5-11 集精瓶的安装 （李秀丽 拍摄）

采精操作是将台羊保定后，引公羊到台羊处，采精人员蹲在母羊右后方，右手握假阴道，贴靠在母羊尾部，入口朝斜下方，与地面呈35°～45°。当公羊爬跨时，快速地将阴茎导入假阴道内，保持假阴道与阴茎平行。公羊用力向前一冲即为射精，此时操作人员应随同公羊跳下时将假阴道口向上，稍停，放出气体，取下集精瓶，盖上盖子（图5-12）送检精室。

图5-12 带盖子的集精瓶 （李秀丽 拍摄）

（3）精液品质检查　精液品质和受胎率有直接关系，必须经过检查与评定方可输精。通过精液品质检查，确定稀释倍数和能否用于输精，这是保证输精效果的一项重要措施，也是对种公羊种用价值和配种能力的检验。精液品质检查要快速准确，取样要有代表性。检精室要洁净，室温保持18～25℃。检查包括外观检查和显微镜镜检两部分。

① 外观检查　正常精液为浓厚的乳白色或乳酪色混悬液体，略有腥味。其他颜色或有腐臭味的均不能用来输精。比如红色表示可能混入血液，黄色表示可能混入尿液等，均不可输精。精液量，用有刻度的灭菌输精器抽取测量。不同品种一次射精的精液量都有一定的范围，过多过少都不正常，应及时查明原因并进行治疗和纠正。如肉用羊精液量一般为0.5～2毫升。

② 显微镜镜检　主要检查以下三项。

a．精子活率　精子活率是评定精液的重要指标之一。精子活率是指在37℃左右条件下精液中直线前进运动的精子百分率。检查时，以灭菌玻璃棒蘸取一滴精液，滴在载玻片上，再滴一滴生理盐水稀释，加盖玻片，放大200～400倍观察。全部精子都作直线前进运动评为1，90%的精子作直线前进运动评为0.9，依此类推。鲜精活率在0.6以上方可用于输精，冻精则要求在0.3以上才可输精。低温保存的一般要求0.5以上才可输精。

采精后和稀释后，以及保存的精液在输精前都要进行活率检查。

b．精子密度　密度是指单位体积的精液中所含的精子数。常用的方法有显微镜观察法、计数法以及光电比色法。

（a）显微镜观察法　取一滴新鲜精液在显微镜下观察（操作同活力的检测，只是不加生理盐水），根据视野内精子多少将精子评为以下几等。

密：视野中精子密集，无空隙，看不清单个精子的运动。

中：精子间距离相当于1个精子的长度，可以看清单个精子的运动。

稀：精子数少，精子间距离很大，远大于两个精子的长度。

无：没有精子。

通常精子密度在“中”以下就不能用于输精。

（b）计数法　用细胞计数板进行。先用红细胞稀释管吸取原精液至0.5刻度处，用纱布擦去吸管头上黏附的精液，再吸取3%～5%的氯化钠溶液到刻度101处，以拇指及中指按住吸管两端充分摇动，使氯化钠溶液与精液充分混匀，这样把精液稀释到200倍。吹掉管内最初几滴液体，然后将吸管尖放在计算板中部的边缘处，轻轻滴入一小滴，让其自然流入计数室内，这时即可在400倍显微镜下查数精子。计数5个大方格精子总数乘以1千万即为l毫升精液中的精子数。

（c）光电比色法　先将经过精确计算精子数的原精液样本0.1毫升加入5毫升蒸馏水中，混匀，在光电比色计中测定透光度，读数记录，重复操作，就可做出精子密度表。以后测定精子密度时，只要按上法测定透光度，然后查表就可知道每毫升精子数。

现在基本上有现成的精子密度表，所以只要测出透光度，就可查出密度。由于显微镜检查受到的影响因素较多，结果有时不太准，因此光电比色法就成为生产中常用的一种方法，比较容易操作。

c．精子形态　即精子的畸形率，精液中形态不正常精子过多会降低受胎率。凡是精子形态不正常的均为畸形精子，如头部过大、过小，双头，双尾，断裂，尾部弯曲，带有原生质滴的，头尾分离的等。一般要求精液中精子的畸形率不超过14%为好。检查方法：采精后的精液，用等温的生理盐水稀释30倍混匀，滴一滴于干净的载玻片上，抹片后在自然状态下晾干，无水酒精固定5分钟后水洗，晾干，滴管吸取姫姆萨染色液，自左至右滴在抹片上，静置染色90分钟，清水清洗，风干后将抹片置于生物显微镜下放大400～600倍观察精子畸形率，每个片子观察不少于500个精子，计算畸形率。

（4）精液的稀释与保存　稀释精液的目的在于扩大精液量，提高优良种公羊的配种效率，促进精子活力，延长精子存活时间，使精子在保存过程中免受各种物理、化学、生物因素的影响。

人工授精所选用的稀释液要力求配制简单，费用低廉，具有延长精子寿命、扩大精液量的效果。最常见的稀释液有以下几种。

① 脱脂乳（牛乳或羊乳）稀释液　新鲜脱脂乳100毫升，青霉素10万～20万单位。

乳汁脱脂方法：新鲜乳汁用4层纱布过滤后，装入三角瓶中，水浴煮沸10分钟（乳汁温度保持在95℃左右），趁热将乳汁装入空的葡萄糖输液瓶内，加盖胶塞，将瓶倒置，在凉处静置12～24小时。脂肪即浮在乳汁的上层。同时，由胶塞插入注射器针头，抽取脂肪层下部的脱脂乳即可。

② 葡萄糖柠檬酸钠卵黄稀释液　葡萄糖3克，蒸馏水100毫升，柠檬酸钠1.4克，青霉素10万～20万单位，卵黄20毫升。

③ 生理盐水稀释液　100毫升蒸馏水，加入氯化钠（化学纯）0.89克，至溶解即成。

其中前两种稀释液既可即时输精，又可用来保存和运输精液，而后一种简便易行，但只能立即输精用，不宜用来保存、运输精液。精液采得后应尽快稀释，其温度应和精液保持一致，一般须在室温和无菌条件下完成。

④ 柠檬酸钠2.8克，乙醇0.05毫升，蒸馏水100毫升。用琥珀酸调pH值至7.0～7.2。

⑤ 柠檬酸钠2.8克，氨基乙醇0.05毫升，蒸馏水100毫升，用琥珀酸调pH值至7.0～7.2。

精液的稀释倍数取决于精子的密度。密度大时稀释倍数可大些，密度较小时稀释倍数则应小些。但大量的试验研究和生产实践结果表明，绵羊精液可以稀释到3～4倍，一次输精量含精子1.5×10⁷以上，受胎率高达93%。

为扩大优秀种公羊的利用效率、利用时间、利用范围，需要有效地保存精液，延长精子的存活时间。为此，必须降低精子的代谢，减少能量消耗。可采用降低温度、隔绝空气和稀释等措施，抑制精子的运动和呼吸，降低能量消耗。精液的主要保存方式如下。

① 常温保存　精液稀释后，保存在15～25℃以下的室温环境中。在这种条件下，只能保存1～2天。

② 低温保存　在常温保存的基础上，进一步缓慢降低至0～5℃。在这个温度下，保存的有效时间为2～3天。

③ 冷冻保存　家畜精液的冷冻保存，是人工授精技术的一项重大革新，它可长期保存精液。牛、马精液冷冻已取得了令人满意的效果。羊的精子不耐冷冻，受胎率较低。

（5）输精　输精是人工授精的最后一个技术环节。适时而准确地把一定量的优质精液输到发情母羊的子宫颈口内0.5～1.0厘米处，这是保证母羊受胎、产羔的关键。

① 输精前的准备　主要包括以下几方面。

a．输精器材的准备　输精前所有的器材要消毒灭菌，对于输精器及开膣器最好蒸煮或在高温干燥箱内消毒。输精器（图5-13，图5-14）以每只母羊准备1支为宜。生产上连续输精时，每输完1只羊后，输精器外壁用酒精棉球擦净，便可继续输精。

图5-13 输精器（一）（何孟莲 拍摄）

图5-14 输精器（二）（李秀丽 拍摄）

b．输精人员的准备　输精人员穿工作服，手指甲剪短磨光，手洗净擦干，用75%酒精消毒，再用生理盐水冲洗。

c．待输精母羊准备　把待输精母羊放在输精室，如没有输精室，可在一块平坦的地方进行。母羊的保定：正规操作应设输精架，若没有输精架，也可以采用横杠式输精架（图5-1）。另一种较简便的方法是由一人保定母羊（图5-2），使母羊后肢固定，抬起高度以输精人员能较方便地找到子宫颈口为宜，适合少数羊的输精。

② 输精　输精前将母羊外阴部用来苏儿溶液擦洗消毒，再用水洗擦干净，或以生理盐水棉球擦洗。输精人员将用生理盐水湿润过的开膣器（图5-15）闭合按母羊阴门的形状慢慢插入，之后轻轻转动90°，打开开膣器。如在暗处输精，要用额灯或手电筒光源或内镜寻找子宫颈口。子宫颈口的位置不一定正对阴道，子宫颈在阴道内呈一小凸起，发情时充血，较阴道壁膜的颜色深，容易寻找。如找不到，可活动开膣器的位置，或变化母羊后肢的位置。输精时，将输精器慢慢插入子宫颈口内0.5～l厘米，将所需的精液量注入子宫颈口内。输精量应保持有效精子数在7500万个以上，即原精液量需要0.05～0.1毫升。有些处女羊，阴道狭窄，开膣器无法充分展开，找不到子宫颈口，这时可采用子宫颈口处输精，但精液量至少增加一倍，即原精液量需要0.1～0.2毫升。还有年龄大的，子宫松弛的，也可加大输精量。壮龄的、受胎率高的，则可输得少点。

图5-15 开膣器 （李秀丽 拍摄）

③ 掌握输精时机　研究证明，绵羊输精时机，对受胎和繁殖率都有影响。应该在母羊开始发情后的12～24小时输精。由于绵羊发情期短，当发现时，母羊可能已发情了一段时间。因此，应及时输精。早上发现的发情羊，当即输精一次，8～12小时后再输精一次。

输精的关键是严格遵守操作规程，操作要细致，子宫颈口要对准，精液量要足够。输精后的母羊要登记，按输精先后组群。加强饲养管理，为增膘、保胎创造条件。

（6）精液的运输与储存　输精点不养种公羊，所需精液，每天定时由授精站取送。送往输精点的精液，经检查合格应迅速包装发送。如果近程输送，当时用以输精，不需特殊降温。输送精液，利用广口保温瓶输送。用双层集精瓶采集的精液不必倒出来，盖上盖装入广口保温瓶内，瓶底及四周垫以棉花，以固定集精瓶，以防碰碎。用经灭菌的试管为容器输送精液时，一定要装好封严，装入广口保温瓶内。双层集精瓶或小试管外面，均应贴上标签，注明公羊号、采精时间、精液量及其等级。运送时，尽可能缩短途中时间，严防剧烈振动。

如果远程长时间运送精液，按下列方法处理。

① 先将广口保温瓶用冷水浸一下，填装半瓶冰块，温度保持在0～5℃。

② 为防止温度突然下降和冰水浸入精液容器内，可将容器放入垫棉花的大试管里，或者将装满精液的小试管，再用玻璃纸包扎管口后，包以纱布置于胶皮内胎中，再放入广口保温瓶内。

③ 精子对温度变化极为敏感，因此对精液的降温和升温都须作缓慢处理。精液送到、取出后，置于18～25℃室温下慢慢升温，经检查合格后即可用于输精。

为了总结经验，摸索规律，检验绵羊改良和育种成果，必须做好种公羊精液品质检查、绵羊配种繁殖等几项记录工作。要求记录准确，定期进行统计分析，以指导工作。